FlowJo分析流式细胞凋亡
第一部分 试剂介绍
用的是Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 碧云天 C1062M便宜好用
这个试剂盒的染色试剂为FITC与PI
用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液,碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
也就是说FITC染色后反应正在凋亡的细胞
PI反应坏死的细胞
FITC+PI反应受处理凋亡影响后死亡的细胞
第二部分 数据录入
!
直接拉进去,fcs是用BD软件测量完成后导出的,一同导出的也有工作数据,但是在flowjo中用不到
第三部分 圈门
以空无染色为母本
调一下X轴和Y轴的坐标
正常细胞在圈住的地方,角落的是杂质,随后应用全部
第三部分 成图
1.调横坐标与纵坐标
2.划线
3.全选应用全部
第四部分 作图
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