NCBI的blast是直接可以生成引物

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

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点击 Primer-blast

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界面如下

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需要关注的地方不多，一一讲解

首先是启动子引物设计：

找到基因序列

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要求不高，物种正确，第一个即可

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进入后搜索：gene bank 点击进去后如下

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启动子有个默认的规则是 在基因转录起始位点前方2000bp左右

因此

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直接修改region 向前2300bp左右

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复制1-2800bp的序列 点击pick primer

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如果需要将启动子潜在的位点2000bp全部克隆下来，我们则需要再2300-2000bp左右设计上游引物；下游引物在2000bp后

因此!删除原有内容，直接复制，然后设置获得引物的区间

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其余参数如下：

PCR product size Min：2000 Max:2500

Database: image-20210702095854327

需要关注的点在产物长度，和primer比对时的数据库，由于启动子在基因组(提取DNA克隆)上；因此选用全基因组数据库进行引物特异性检测

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生成image-20210702112913057

出来的都是在基因组上特异性较好的引物了，自己挑选